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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)總結(jié)
更新時(shí)間:2013-12-16   點(diǎn)擊次數(shù):1223次

    檢測系統(tǒng)是應(yīng)用于在zui敏感的技術(shù)手段,免疫反應(yīng)的研究和ELISA試劑盒生產(chǎn),起著非常重要的作用。操作步驟雖然ELISA試劑盒看起來比較簡單,但實(shí)驗(yàn)過程操作點(diǎn)的許多需要掌握操作步驟,如果稍有不慎,操作不合理的地方,會造成很多問題,ELISA試劑盒影響了檢測的精度,大大降低了測試質(zhì)量。如花板,假陽性,全彩色,全彩色,顏色空間的低。。。。。。這就要求我們在實(shí)驗(yàn)過程做了總結(jié),逐步完善,也就是學(xué)習(xí),分享學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)。以下總結(jié)實(shí)驗(yàn)和解決共同的問題,與你分享。
   1,包是非常重要的,蛋白質(zhì)濃度,原來的性質(zhì)是否降解,抗體,使你可以識別,從而節(jié)省抗原是非常重要的,我做的重組蛋白,他嚴(yán)厲警告我必須在冰浴是緩慢的融化是真理。有一些涂層可不是蛋白質(zhì),生物素和脂類或小分子,我們的裝修之前涂,我簡要如下: 2460親和素-生物素抗生物素蛋白涂層:*載體,加入生物素標(biāo)記的,這種鍍膜的方法均勻,牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原定量測定。脂質(zhì):可以在有機(jī)溶劑(如酒精)孔加入溶解后,打開冰箱隔夜或冷干,待酒精揮發(fā),在固體表面上進(jìn)行自然干燥的固體脂質(zhì)。小分子必須依靠和大的載體蛋白偶聯(lián)可以固定在固體載體上。
   2,包衣液的選擇,碳酸鹽緩沖液通常選擇9。6。但有時(shí)因?yàn)闇y試需求,數(shù)據(jù)包緩沖溶液是一種特殊的原料可采用中性包裝。應(yīng)注意以下原則:蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合,取決于在固相的疏水性基團(tuán)和疏水性相互作用的載體表面蛋白分子的結(jié)構(gòu),物理吸附是非特異性的,蛋白分子量,等電點(diǎn),大集中,小分子蛋白蛋白質(zhì)通常含有疏水基團(tuán)越多,所以更容易吸附在固相載體表面。測試也有很強(qiáng)的理論于實(shí)踐,看zui后一個(gè)可以應(yīng)用到我們的測試。除了剛才提到的9。6碳酸鹽緩沖液常用的涂料溶液,和磷酸鹽緩沖液和7-8 7。2 -緩沖。
   3,關(guān)閉:以下包之后是無關(guān)的蛋白質(zhì)溶液濃度高,涂層工藝。隨函附上使大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,和干擾物質(zhì)的免疫排斥和吸附步驟。ELISA試劑盒常用的密封:0。05% - 0。5%牛血清白蛋白;10%或1%明膠牛血清;脫脂奶粉,價(jià)格相對低廉,可用于高濃度(5%~10%);和一些罕見的使用各種動物血清(主要是為了消除類似的蛋白和酪蛋白等干擾)。但到底選擇什么,根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體實(shí)踐。
   4,洗板:可以說,在中操作,清洗是在主要的關(guān)鍵技術(shù)。由于聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍存在的,為了實(shí)現(xiàn)自由酶與客觀相結(jié)合的標(biāo)記的分離,在板料孔中殘留游離和吸附的非特異性干擾物質(zhì)的去除,洗滌,并應(yīng)將干擾物質(zhì)洗滌下來的非特異性吸附。所以在洗衣板會有一定的誤差,非常人的因素(當(dāng)然也有洗衣機(jī)除條件),是不完整的或弦清孔,系統(tǒng)的影響是如此敏感,但不小。
   5,加抗體(抗標(biāo)本和兩個(gè)):注意的槍頭,槍頭。樣品用稀釋稀釋,也可以用稀釋的閉解。如果要添加兩個(gè)電阻,但也要注意兩個(gè)反工作濃度的廢物,太高,太低的光的顏色。
   6,顏色:顏色系統(tǒng)有很多,我們開始做,選擇適當(dāng)?shù)念伾到y(tǒng)。ELISA試劑盒注意顏色系統(tǒng)酶底物結(jié)合物加硫柳汞泵節(jié)約,綴合物加*。7,每次都盡可能的陰和陽空三控制,如分析問題的出現(xiàn)。
相關(guān)知識:1,問:通過間接檢測小鼠血清中抗體做,空白對照組,陰性對照,血清稀釋度的陽性率為5000,10000,100000,200000,用生物素標(biāo)記的山羊抗小鼠抗體,辣根過氧化物酶與木質(zhì)素。

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